CRISPR-Cas9：基因编辑新时代|今热点
在现代生物科技领域，CRISPR-Cas9技术已经成为最受欢迎的基因编辑工具之一。这种技术可以用来研究基因功能，疾病诊断和治疗等方面。其中最常用的应用就是构建基因敲除细胞模型。
本文将介绍CRISPR技术的基本原理和操作流程，以帮助您更好地了解和使用这种重要的基因编辑工具。
一、CRISPR技术的基础原理
(相关资料图)
CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）技术最初是从大肠杆菌中发现的一种天然的细菌防御系统，后来被发现可以被用于基因编辑。
CRISPR-Cas9技术基于一种叫做“RNA导向”的机制（guide RNA, gRNA），这种机制可以让CRISPR-Cas9系统选择性地识别和切割DNA中的特定序列。
这意味着我们可以使用CRISPR-Cas9来精确地编辑细胞中的基因序列，包括基因敲除、插入、替换等等。
二、操作流程
CRISPR-Cas9技术的操作流程分为四个主要步骤：设计gRNA、构建质粒、转染细胞、鉴定细胞。
1.设计gRNA：gRNA是由CRISPR-Cas9系统识别并切割目标DNA的关键部分。我们需要在目标基因中选择一个合适的靶点序列，设计gRNA来引导Cas9蛋白识别并切割该序列。
耐思开发的Quick-KO®基因敲除试剂盒根据已知的人和小鼠编码基因，采用优化的预设计方案，相较于传统方案具有更高的敲除效率。
2.构建质粒：质粒是携带CRISPR-Cas9系统和gRNA的载体。在构建质粒时，我们需要将Cas9基因和gRNA序列克隆到质粒中，并确保它们可以在细胞中稳定表达。
耐思Quick-KO®基因敲除试剂盒中的Cas9质粒和gRNA质粒分别携带Blasticidin和Puromycin/mCherry筛选标记，方便用户进行阳性细胞富集。
3.转染细胞：将质粒转染到目标细胞中，让它们表达CRISPR-Cas9系统并编辑目标基因。转染可以通过电穿孔或者化学转染的方法进行。
此外，针对转染效率低的细胞，也可以选择慢病毒款的耐思Quick-KO®基因敲除试剂盒。
4.鉴定细胞：最后一步是对成功转染的细胞进行筛选，通过PCR和测序的方法，筛选出具有目标基因敲除的细胞。
三、目标细胞类型
CRISPR技术可以用于多种细胞类型的编辑，包括哺乳动物细胞、酵母菌、昆虫细胞和植物细胞等。
其中，人类细胞是最常用的细胞模型之一，可以用于疾病模型的构建、药物筛选和基础研究等方面。
耐思Quick-KO®基因敲除试剂盒主要针对人类细胞、小鼠细胞等哺乳动物细胞开发。
对于不同的目标细胞类型，我们需要根据细胞的特点和CRISPR技术的限制来选择合适的CRISPR-Cas9系统和转染方法。
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2021-09-18